MICROSCOPIO DE FLUORESCENSIA
ACST
¿QUÉ ES FLUORESCENCIA?
Es un fenómeno físico que resulta de la interacción de los electrones de los últimos orbitales con la radiación electromagnética (luz).
Al ser la fluorescencia de rayos X una técnica cuyo objetivo principal es la determinación cuantitativa de los elementos químicos presentes en la muestra, es imprescindible que tenga un alto grado de exactitud y reproducibilidad. Ambos parámetros se encuentran en relación directa con lacalidad de la preparación de la muestra.
Las moléculas fluorescentes (fluoróforos) absorben luz de determinada longitud de onda y emiten luz de otra longitud de onda, más larga. Si una muestra de este tipo es iluminada a su longitud de onda absorbente (de excitación) y visualizada a través de un filtro que sólo permita pasar la luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida, la muestra aparece brillante sobre un fondo oscuro. La intensidad y el color de la luz es una propiedad característica de la molécula fluorescente utilizada. Esta propiedad es utilizada por la microscopía de fluorescencia, la cual permite:
• Visualizar partes de la célula: membrana plasmática, núcleo, vacuolas, retículo endoplásmico, etc.
• Estudiar procesos celulares: división celular, muerte celular, cambios en el potencial de membrana, endocitosis y exocitosis. • Observar determinados iones, cambios de pH, etc.
• Diferenciar partículas muy pequeñas que por contraste de fases no se resolverían.
• Localizar moléculas específicas: proteínas, lípidos, etc.
• Estudiar la interacción entre moléculas in vivo.