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Centro de Microscopia y Microanalisis

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¿QUÉ ES FLUORESCENCIA?

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Es un fenómeno físico que resulta de la interacción de los electrones de los últimos orbitales con la radiación electromagnética (luz).

Al ser la fluorescencia de rayos X una técnica cuyo objetivo principal es la determinación cuantitativa de los elementos químicos presentes en la muestra, es imprescindible que tenga un alto grado de exactitud y reproducibilidad. Ambos parámetros se encuentran en relación directa con lacalidad de la preparación de la muestra. 

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Las moléculas fluorescentes (fluoróforos) absorben luz de determinada longitud de onda y emiten luz de otra longitud de onda, más larga. Si una muestra de este tipo es iluminada a su longitud de onda absorbente (de excitación) y visualizada a través de un filtro que sólo permita pasar la luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida, la muestra aparece brillante sobre un fondo oscuro. La intensidad y el color de la luz es una propiedad característica de la molécula fluorescente utilizada. Esta propiedad es utilizada por la microscopía de fluorescencia, la cual permite: 

 

• Visualizar partes de la célula: membrana plasmática, núcleo, vacuolas, retículo endoplásmico, etc. 

• Estudiar procesos celulares: división celular, muerte celular, cambios en el potencial de membrana, endocitosis y exocitosis. • Observar determinados iones, cambios de pH, etc. 

• Diferenciar partículas muy pequeñas que por contraste de fases no se resolverían. 

• Localizar moléculas específicas: proteínas, lípidos, etc. 

• Estudiar la interacción entre moléculas in vivo. 

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